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HT-29/DDP細胞株的構建原理

點選次數•☁╃↟₪:2315 釋出時間•☁╃↟₪:2016-06-21
HT-29/DDP細胞株原理•☁╃↟₪:
HT-29/DDP細胞株轉染☁◕│,就是轉染的質粒DNA整合到宿主細胞染色體上☁◕│,使宿主細胞可
長期表達目的基因及蛋白│☁。需要在瞬時轉染基礎上對靶細胞進行篩選或者應用高轉染效率的病毒☁◕│,根據不同基因載體中所含有的抗性標誌選用相應的藥物進行細胞傳代☁◕│,從而得到可穩定表達目的基因的細胞系│☁。
HT-29/DDP細胞株應用•☁╃↟₪:
HT-29/DDP細胞株觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(穩定☁◕│,可長期進行研究)
HT-29/DDP細胞株一般流程•☁╃↟₪:
1) 篩選濃度測定•☁╃↟₪:以10——14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度
2) 細胞接種•☁╃↟₪:轉染實驗前天接種細胞☁◕│,各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定│☁。進行轉染當天細胞密度應達到60%——80%覆蓋
3) 細胞轉染(病毒·◕₪◕、脂質體·◕₪◕、電穿孔·◕₪◕、FuGENE 6)
4) 利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選
5) 鑑定篩選結果
HT-29/DDP細胞株前期需要準備•☁╃↟₪:
l 構建好的外源基因載體
l 待轉染的細胞系(1×106個細胞☁◕│,可傳代☁◕│,倍增時間小於48小時)以及細胞培養條件的說明
l 若需要檢測靶基因的表達變化☁◕│,請提供相應抗體
HT-29/DDP細胞株結果呈現•☁╃↟₪:
構建好的穩定表達細胞系及相關的外源基因表達分析
BTBD6BTBD6蛋白抗體
BMPERBMP內皮細胞調節蛋白抗體
HCV NS transactivated protein 8丙肝病毒NS反轉錄蛋白8抗體
BMP1骨形態發生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內切酶抗體
BMP9骨形態發生蛋白9抗體
Beta tubulin cofactor D微管蛋白β輔助因子D抗體
BTR1鈣粘蛋白相關蛋白受體BTR1抗體
Bub3有絲分裂蛋白BUB3抗體
BHLHB9/p60TRPp60TRP蛋白抗體
BLMH博萊黴素水解酶抗體
Aggrecan短蛋白聚糖抗體
BTBD3BTB/POZ結構域蛋白3抗體
BBS12巴爾得-別德爾綜合徵相關蛋白12抗體 

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