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胎牛血清透析的生產工藝來了解下

點選次數·••│•:1106 釋出時間·••│•:2021-03-16
1.胎牛血清透析的生產工藝

a.胎牛血清透析是在胎牛血清的基礎上進行加工的╃•☁│·。

胎牛血清在無菌條件下要經過0.1微米膜三重過濾•│,要進行一系列的檢測•│,包括理化性質檢查(如滲透壓和pH值)•│,成分檢查(如內毒素和血紅蛋白)▩•▩╃✘、外源因子檢查(如細菌▩•▩╃✘、病毒和支原體)以及促進細胞增殖的檢查等╃•☁│·。

透析胎牛血清為保證其效能和安全性•│,也需具備胎牛血清的這些工藝和檢查╃•☁│·。

b.透析胎牛血清•│,顧名思義•│,需經過透析╃•☁│·。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15M NaCl中透析╃•☁│·。由於該透析膜只允許10 kDa以下的小分子穿過•│,在滲透壓的作用下•│,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中╃•☁│·。10 kDa以下的小分子有化學小分子▩•▩╃✘、核苷酸▩•▩╃✘、某些激素▩•▩╃✘、鹽▩•▩╃✘、低分子量蛋白質▩•▩╃✘、氨基酸▩•▩╃✘、細胞因子▩•▩╃✘、葡萄糖▩•▩╃✘、殘留抗生素和其他外源分子╃•☁│·。那麼透析的效果如何↟◕✘✘☁?以及透析到何時呢↟◕✘✘☁?由於不可能監測全部小分子•│,因此常選用葡萄糖為代表╃•☁│·。血清中葡萄糖<5 mg/dL•│,即可以停止透析了╃•☁│·。透析過程中•│,除監測葡萄糖濃度外(可採用葡萄糖氧化酶方法測定)•│,還需仔細監測pH值和滲透壓╃•☁│·。

c.該透析採用的是切向流過濾╃•☁│·。切向流是指液體流動方向與過濾方向呈垂直方向的過濾形式╃•☁│·。該方式使液體流動在濾膜表面產生剪下力•│,減小了濾膜上的物質堆積•│,保證了穩定的過濾速度╃•☁│·。

2.胎牛血清透析的應用

透析胎牛血清主要用於可能需要關注小分子濃度的特殊研究╃•☁│·。這主要包括四個領域·••│•:蛋白質組學▩•▩╃✘、同位素標記▩•▩╃✘、細胞通訊以及報告基因細胞系的篩選•│,其中有些領域是相互交叉的╃•☁│·。以下稍作舉例╃•☁│·。

a.細胞培養條件下穩定同位素標記技術╃•☁│·。

這是一項以質譜為基礎的定量蛋白質組學技術•│,它將13C或15N標記的氨基酸摻入到培養基中培養細胞•│,來標記細胞內新合成的蛋白質•│,一般培養5-6代•│,細胞中的蛋白質將都被同位素標記╃•☁│·。然後質譜分析•│,即可比較經過不同處理的細胞•│,其內部蛋白質丰度的變化╃•☁│·。它還可用於正常細胞與病理狀態細胞二者的比較╃•☁│·。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾•│,這時就需要用到透析胎牛血清•│,以保證摻入細胞蛋白中的氨基酸均為標記氨基酸(常採用賴氨酸或精氨酸)╃•☁│·。

b.工程細胞株的篩選╃•☁│·。

以常見的工程細胞株CHO-DFGRˉ為例•│,該細胞自身缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR)•│,必須在添加了次黃嘌呤▩•▩╃✘、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養液中才能得以存活╃•☁│·。如將含有目的基因與DHFR基因的質粒轉染細胞•│,則可以得到在不含上述新增劑的培養基上也能生長的細胞克隆╃•☁│·。透過甲氨蝶呤(MTX)進一步篩選•│,可進一步得到能表達大量目的蛋白的細胞克隆╃•☁│·。這時的胎牛血清由於不含有次黃嘌呤和胸腺嘧啶等•│,也常作為選擇培養基的一部分•│,參與陽性轉染細胞克隆的篩選╃•☁│·。

c.研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒▩•▩╃✘、鋅對某種型別細胞增殖▩•▩╃✘、分化的影響╃•☁│·。

這時也需要用透析胎牛血清•│,以避免培養體系中天然存在的這些物質的干擾╃•☁│·。 
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